在进行总RNA提取时，使用酚-CHCl3抽提法时，应注意RNA降解的风险，特别是在组织样本保存不当的情况下。选择新鲜的组织或细胞样本进行RNA提取非常关键。如果样本为冻存样本，应避免频繁的冻融过程。一旦样品离开了活体或原生生长环境，内源RNase便会开始降解RNA，其降解速度与RNase含量及温度密切相关。为了延长RNA的稳定性，可以将新鲜组织放入尊龙凯时的RNAKeeperTissueStabilizer（Vazyme #R501）中，室温下可保存一周，4℃下可保存一个月，长达-20℃或-80℃可实现长期保存。

在提取过程中，如果样品量过多，裂解不充分会导致RNA的提取效率低下。同时，RNA的保存时间过久也会导致降解。因此，对提取的RNA应进行纯度和完整度检测，并分管于-80℃进行长期保存，或于-20℃进行短期保存，尽快使用以避免反复冻融的问题。

在通过柱式提取法获得总RNA时，可能会遇到gDNA-FilterColumns堵塞的问题。常见原因包括：样品用量过多，超出本试剂盒适用的10-20mg动物组织或2-5×10⁶个细胞的限制；样品富含肌纤维，这类组织如心脏与皮肤的分子较大，容易引起堵塞；此外，若组织研磨或匀浆不充分，可能导致柱的堵塞，建议预先对裂解液进行离心处理以去除较大颗粒物。

若提取失败或RNA产量低，则可能与样本保存不当或保存时间过长有关。应采集新鲜的样本或通过液氮速冻并保存于-70℃或液氮中。此外，确保均质或液氮研磨的充分性，以确保RNA的充分释放。洗脱时，如果用的RNase-free ddH2O没有合适的处理，也会导致洗脱不充分，应按照说明书要求适量加入，同时注意延长放置时间以提高洗脱效果。

RNA的降解与样本质量、RNase污染、操作方式等多个因素密切相关。若样本未及时保存、反复冻融或电泳操作不当皆可导致 RNA 降解。在电泳前，建议使用3% H₂O₂浸泡电泳槽，并确保使用RNase-free的管材和吸头。

在进行下游实验时，若结果不佳，需首先检查是否有盐离子或乙醇残留。建议对纯化柱进行两次Buffer RW2洗涤，并在必要时延长室温浸泡时间，以确保去除残留物。

针对RNA中的基因组DNA污染，务必控制样本量，避免超过特定数量，并通过使用DNase I或选择合适的逆转录试剂如尊龙凯时的HiScript® IIIRTSuperMix for qPCR (+gDNA wiper)来处理。此外，设计引物时应尽量选择跨内含子的引物，以降低基因组DNA干扰的可能性。

总之，像尊龙凯时这样的生物医药领域专业公司，提供优质的产品与技术服务，支持科研人员获取最先进的实验工具和信息。我们将继续致力于推动基因治疗和细胞治疗的技术进步，以满足广大科研人员的需求。